實驗室經(jīng)典實驗技巧

vinny911

過柱的實驗方法和技巧：

注意：有機溶劑對身體特有害別是心肺；肝臟等所有過柱操作都要在通風(fēng)櫥里進(jìn)行??！

常說的過柱子應(yīng)該叫柱層析分離，也叫柱色譜。我們常用的是以硅膠或氧化鋁作固定相的吸附柱。由于柱分的經(jīng)驗成分太多，所以下面我就幾年來過柱的體會寫些心得，希望能有所幫助。

1、柱子可以分為：加壓，常壓，減壓

壓力可以增加淋洗劑的流動速度，減少產(chǎn)品收集的時間，但是會減低柱子的塔板數(shù)。所以其他條件相同的時候，常壓柱是效率最高的，但是時間也最長，比如天然化合物的分離，一個柱子幾個月也是有的。減壓柱能夠減少硅膠的使用量，感覺能夠節(jié)省一半甚至更多，但是由于大量的空氣通過硅膠會使溶劑揮發(fā)（有時在柱子外面有水汽凝結(jié)），以及有些比較易分解的東西可能得不到，而且還必須同時使用水泵抽氣（很大的噪音，而且時間長）。

以前曾經(jīng)大量的過減壓柱，對它有比較深厚的感情，但是自從嘗試了加壓后，就幾乎再也沒動過減壓的念頭了。加壓柱是一種比較好的方法，與常壓柱類似，只不過外加壓力使淋洗劑走的快些。壓力的提供可以是壓縮空氣，雙連球或者小氣泵（給魚缸供氣的就行）。特別是在容易分解的樣品的分離中適用。壓力不可過大，不然溶劑走的太快就會減低分離效果。個人覺得加壓柱在普通的有機化合物的分離中是比較適用的。

2、關(guān)于柱子的尺寸，應(yīng)該是粗長的最好

柱子長了，相應(yīng)的塔板數(shù)就高。柱子粗了，上樣后樣品的原點就小（反映在柱子上就是樣品層比較?。?，這樣相對的減小了分離的難度。試想如果柱子十厘米，而樣品就有二厘米，那么分離的難度可想而知，恐怕要用很低極性的溶劑慢慢沖了。而如果樣品層只有0.5厘米，那么各組分就比較容易得到完全分離了。當(dāng)然采用粗大的柱子要犧牲比較多的硅膠和溶劑了，不過這些成本相對于產(chǎn)品來說也許就不算什么了（有些不環(huán)保的說，不過溶劑回收重蒸后也就減小了部分浪費）。

現(xiàn)在見到的柱子徑高比一般在1：5～10，書中寫硅膠量是樣品量的30～40倍，具體的選擇要具體分析。如果所需組分和雜質(zhì)分的比較開（是指在所需組分rf在0.2～0.4，雜質(zhì)相差0.1以上），就可以少用硅膠，用小柱子（例如200毫克的樣品，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我覺得可以增加柱子的直徑，比如用3cm的，也可以減小淋洗劑的極性等等。

3、關(guān)于無水無氧柱，適用于對氧，水敏感，易分解的產(chǎn)品

可以濕柱，也可以干柱。不過在樣品之前至少要用溶劑把柱子飽和一次，因為溶劑和硅膠飽和時放出的熱量有可能是產(chǎn)品分解，畢竟要分離的是敏感的東東，小心不為過。也是因為分離的東西比較敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。至于是加壓、常壓、減壓，隨需而定。因為是schlenk操作，所以點板是個問題，如果樣品是顯色的，恭喜了，不用點板，直接看柱子上的色帶就行了。如果樣品無色，只好準(zhǔn)備幾十個schlenk瓶，一瓶一瓶的點，不過幾次之后就知道樣品在哪，也就可以省些了。

像我以前過一根無水無氧柱，需要六個schlenk，現(xiàn)在只一個就能把所要的全收集到。無水無氧柱中用的比較多的是用氧化鋁作固定相。因為硅膠中有大量的羥基裸露在外，很容易是樣品分解，特別是金屬有機化合物和含磷化合物。而氧化鋁可以做成堿性、中性和酸性的，選擇余地比較大，但是比硅膠要貴些。聽說有個方法，就是用石英做柱子，然后用HF254做固定相，這樣在柱子外面用紫外燈一照就知道產(chǎn)品在哪里了，沒有驗證過。哪位做過可以提出來大家參詳參詳。

4、關(guān)于濕法、干法上樣

濕法省事，一般用淋洗劑溶解樣品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶劑越少越好，不然溶劑就成了淋洗劑了。很多樣品在上柱前是粘乎乎的，一般沒關(guān)系。可是有的上樣后在硅膠上又會析出，這一般都是比較大量的樣品才會出現(xiàn)，是因為硅膠對樣品的吸附飽和，而樣品本身又是比較好的固體才會發(fā)生，這就應(yīng)該先重結(jié)晶，得到大部分的產(chǎn)品后再柱分，如果不能重結(jié)晶那就不管它了，直接過就是了，樣品隨著淋洗劑流動會溶解的。有些樣品溶解性差，能溶解的溶劑又不能上柱（比如DMF,DMSO等，會隨著溶劑一起走，顯色是一個很長的脫尾），這時就必須用干法上柱了。

樣品和硅膠的量有一種說法是1：1，我覺得是越少越好，但是要保證在旋干后，不能看到明顯的固體顆粒（那說明有的樣品沒有吸附在硅膠上）。溶劑的選擇。當(dāng)然是最便宜，最安全，最環(huán)保的了。所以大多選用石油醚，乙酸乙酯。文獻(xiàn)中有寫用正己烷的，太貴了，除非特別需要不要用不然銀子嘩嘩的，流的比淋洗劑還快，不過因為極性很小，有時還是非它不可。**也可以用，但是就是容易睡覺，注意保持清醒別讓溶劑流干了，那樣柱子也就不爽了。二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅膠的吸附是一個放熱過程，所以夏天的時候經(jīng)常會在柱子里產(chǎn)生氣泡，天氣冷的時候會好一些。甲醇，據(jù)說能溶解部分的硅膠，所以產(chǎn)品如果想過元素分析的話要留神，應(yīng)該經(jīng)過后繼處理，比如說重結(jié)晶等。

其他的溶劑用的相對較少，要依個人的不同需要選擇了。由于某些原因，用到的淋洗劑多是大包裝的（便宜嘛），我們這里是用10升或25升的塑料桶裝的，就要注意這些工業(yè)品的純度是較低的。經(jīng)常能夠從送來的大桶底部看見有色的雜質(zhì)，其他的雜質(zhì)就可想而知了，所以在比較嚴(yán)格的柱分時就要對溶劑重蒸。當(dāng)然過原料時就可以免去這一步了，反正下面還有提純的方法。

另外溶劑在過柱子后最好也回收使用，一方面環(huán)保，另一方面也能節(jié)省部分經(jīng)費，缺點是要消耗一定的人工。這里要注意的是，一般在過柱同時進(jìn)行的是減壓旋蒸，石油醚和乙酸乙酯的比例由于揮發(fā)度的不同會導(dǎo)致極性的變化，一般會使得極性變大，在梯度淋洗時比較合適，正好極性越來越大了。在過完柱子后，溶劑最后回收要采用常壓，因為在減壓旋蒸時會有部分低沸點的雜質(zhì)一起出來，常壓時就會減少這種現(xiàn)象，如果雜質(zhì)和你下面要過的樣品有反應(yīng)那就慘了。

5、關(guān)于操作問題：

5.1 、裝柱

柱子下面的活塞一定不要涂潤滑劑，會被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的，可以采用四氟節(jié)門的。干法和濕法裝柱覺得沒什么區(qū)別，只要能把柱子裝實就行。裝完的柱子應(yīng)該要適度的緊密（太密了淋洗劑走的太慢），一定要均勻（不然樣品就會從一側(cè)斜著下來）。書中寫的都是不能見到氣泡，我覺得在大多數(shù)情況下有些小氣泡沒太大的影響，一加壓氣泡就全下來了。當(dāng)然如果你裝的柱子總是有氣泡就說明需要多練習(xí)了。但是柱子更忌諱的是開裂，甭管豎的還是橫的，都會影響分離效果，甚至作廢！

5.2、 加樣

用少量的溶劑溶樣品加樣，加完后將下面的活塞打開，待溶劑層下降至石英砂面時，再加少量的低極性溶劑，然后再打開活塞，如此兩三次，一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗劑，一開始不要加壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2～4cm就夠了），再加壓，這樣避免了溶劑（如二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行。

5.3、 淋洗劑的選擇

感覺上要使所需點在rf0.2～0.3左右的比較好。不要認(rèn)為在板上爬高了分的比較開，過柱子就用那種極性，如果rf在0.6，即使相差0.2也不容易在柱子上分開，因為柱子是一個多次爬板的狀態(tài)，可以通過公式的比較：0.6/0.8一次的分離度，肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大。

5.4 、樣品的收集

用硅膠作固定相過柱子的原理是一個吸附與解吸的平衡。所以如果樣品與硅膠的吸附比較強的話，就不容易流出。這樣就會發(fā)生，后面的點先出，而前面的點后出。這時可以采用氧化鋁作固定相。

另外，收集的試管大小要以樣品量而定，特別是小量樣品，如果用大試管，可能一根就收到了三個樣品，wuwu。如果都用小試管那工作量又太大。

5.5、 最后的處理

柱分后的產(chǎn)品，由于使用了大量的溶劑，其中的雜質(zhì)也會累積到產(chǎn)品中，所以如果想送分析，最好用少量的溶劑洗滌一下，因為大部分的雜質(zhì)是溶在溶劑里的，一洗基本就沒了，必要時進(jìn)行重結(jié)晶。

另外，再過柱的時候，有時會出現(xiàn)氣泡，一是和使用的溶劑有關(guān)，如果是易揮發(fā)的溶劑，如**、二氯甲烷等，在室溫稍高的情況下，很容易出現(xiàn)這種現(xiàn)象，因此，在室溫高的時候，可以選擇沸點較高，揮發(fā)相對小的溶劑。還有，使用混合溶劑時，使用的兩種溶劑的沸點應(yīng)該相差不大，如：乙酸乙酯和石油醚(60~90),而**卻要選擇30－60的石油醚。二是：不論是用帶砂板的還是塞棉花的，在裝柱之前，都要將空氣用加壓的方法將空氣排干，這樣就可避免柱中有空氣！過柱子需要耐心，不要著急。

萃取時嚴(yán)重乳化,求解決方法 :

我正在做一個產(chǎn)品,產(chǎn)物需用稀鹽酸溶液提取有機溶劑中的產(chǎn)物,產(chǎn)物與HCL成鹽后溶解在水相中，但在此過程中有時會產(chǎn)生嚴(yán)重的乳化現(xiàn)象，極難分液，共提取三次，不定在哪次產(chǎn)生乳化，求助：如何避免乳化？乳化后如何處理？謝謝。

常用方法： 1，長時間靜置 2，加入少量電解質(zhì)（如氯化鈉）破乳或增大水相比重使兩相分離3，若因溶液呈堿性，可加入少量酸，反之加堿 4，過濾 5，加入乙醇或磺化蓖麻油等破乳劑

氰化鈉、氰化鉀 ：

我就要用大量的氰化鈉、氰化鉀了，好害怕。有人能給我點建議嗎？如何防護(hù)？容器如何處理？
任何情況下不要在酸性條件下使用
做好勞動防護(hù)措施，手有傷口一定小心 如反應(yīng)對水沒有要求，可以用92％的NaCN，含一定的水，呈濕粉狀后處理還是次氯酸鈉好用一些

解毒劑：亞硝酸異戊酯，口服或注射

5% Pd/C 催化劑的制備：

將10%的硝酸和活性碳粉末混合均勻，并在蒸汽浴上煮2～3 h，過濾，用水洗凈硝酸后，于100～110℃烘干。稱取11.5 g處理過的活性碳，懸浮在136.0 mL水中，水浴加熱至80 ℃，加入溶有0.9 g氯化鈀的2.3 mL濃鹽酸與5.7 mL水的混合液，然后再加入37%甲醛溶液0.9 mL。攪拌下滴加30%的NaOH水溶液，直至反應(yīng)液呈堿性，繼續(xù)攪拌5min。過濾，濾餅用水洗滌10次，然后將濾餅置于空氣中晾干，即得5% Pd/C催化劑，再移至裝有KOH的干燥器中貯存。

胺類化合物的分離 ：

我在做一個仲胺與取代叔胺反應(yīng)生成叔胺的反應(yīng)。后處理非常麻煩，TLC的條件是CHCl3:MeoH=10:1, 我用CHCl3:MeOH=100:5, 100:3, 100:1(均含0.2%Et3N)過了三次柱了，還是沒得到純的產(chǎn)品。反應(yīng)混合物里面有四個點，產(chǎn)物是第三個點，和第二個點距離非常近。有沒有哪位仁兄有處理胺類化合物柱色譜分離的技巧？可否指點一二？提前致謝！我現(xiàn)在猜測產(chǎn)物叔胺可能也溶解于水，所以我用Chcl3提取的效率一直不太高。

首先，體系用二氯甲烷和甲醇會好一些，最好含有1%7N氨甲醇溶液，毒性小，容易旋干。

第二，提取時，水相要點板監(jiān)控。最好也用二氯甲烷。如果不行加一點thf.

第三，用反相硅膠過試試。

(2)、反應(yīng)不用氮保護(hù)亦可以的.

(3)、要注意過程點板監(jiān)控,原料和產(chǎn)物極性相差較小.

格氏試劑的實驗室制法：

所有溶劑、試劑、儀器均經(jīng)過干燥/烘干處理。無水**或者THF，加1.05eq鎂屑，惰性氣體保護(hù)，溫?zé)幔ㄓ行┓浅；顫姷挠檬覝厣踔帘洌l件下滴加約1/10的鹵代烴，引發(fā)格氏反應(yīng)（鎂屑上冒小泡泡），如果引發(fā)不易，可以加熱至微弱回流或者加少量的碘。引發(fā)后緩慢滴加剩余的鹵代烴，過快會猝滅格氏反應(yīng)或者引起偶聯(lián)。加完所有的鹵代烷后微弱回流1小時，絕大多數(shù)的鎂屑會反應(yīng)完全，體系為灰色近透明液體。降溫后有可能析出格氏試劑沉淀，如果漏氣也會出現(xiàn)沉淀物。殘余的鎂屑，如果很少，可以不經(jīng)處理，直接進(jìn)行下步反應(yīng)。如果鎂的投料當(dāng)量較大（有時用1.2~1.5eq），可以將格氏試劑靜置后吸取上清液或者壓濾至新的反應(yīng)瓶中。

實驗室制法，與工業(yè)制法沒本質(zhì)的差別。

一種金屬有機化合物，通式RMgX(R代表烴基，X代表鹵素）。1901年由F.-A.V.格利雅首次使用鹵代烴RX與鎂在醚類溶液中反應(yīng)制得。又稱格利雅試劑。格氏試劑廣泛用于有機合成中，從RMgX可以制得RH、R-COOH、R-CHO、R-CH2OH、R-OH、和RnM（n為金屬的化合價，M為其他金屬)。在合適的情況下，RMgX還能與α、β-不飽和羰基化合物發(fā)生共軛的加成反應(yīng)。

格氏試劑的制法是將鹵代烴（常用氯代烷或溴代烷）**溶液緩緩加入被**浸泡著的鎂屑中，加料速度應(yīng)能維持**微沸，直至鎂屑消失，即得格氏試劑。反應(yīng)是放熱的，如果反應(yīng)起動遲鈍，可加一小粒碘來啟動，一旦反應(yīng)開始，**發(fā)生沸騰后，**的蒸氣足以排除系統(tǒng)內(nèi)空氣的氧化作用，但不允許有水。格氏試劑易與空氣或水反應(yīng)，故制得后應(yīng)就近在容器中反應(yīng)。氯乙烯和結(jié)合在烯碳上的氯不能在**中與鎂反應(yīng)，如用四氫呋喃代替**，可制得氯化乙烯基鎂試劑。這種試劑有人稱為諾曼試劑。為了更好地啟動鎂與鹵代烴的反應(yīng)，可用少量1，2-二溴乙烷代替碘，特別是**中如有少量水時，二溴乙烷與鎂很快反應(yīng)，生成溴化鎂和乙烯，溴化鎂有去水干燥作用，新鮮的鎂與給定的鹵代烴就可反應(yīng)生成需要的格氏試劑。

乙酸酐的純化問題 ：
最近要用乙酸酐和格式試劑做?；磻?yīng)，乙酸酐中的雜質(zhì)乙酸會干擾反應(yīng)，所以需要純化。查了一下，發(fā)現(xiàn)有加五氧化二磷回流后重蒸的，也有用Mg除乙酸(80度)的，大家覺得哪種方法效果比較好，又容易操作？

一樓的問題是除去醋酐中微量的醋酸,所以采取分餾的方法或甲苯共蒸的方法都不可取,加五氧化二磷回流后重蒸是正解,我們平常都是這樣做的

產(chǎn)物過濾太難，有何高招 ：

我在甲醇鈉溶液中環(huán)合得到的嘧啶產(chǎn)物，蒸掉甲醇后，加水溶解，鹽酸中和后得到的固體產(chǎn)物很難過濾（抽濾和離心都很困難），是不是因為含鹽量太高？由什么辦法能使產(chǎn)物容易過濾？

可能是體系中的有機雜質(zhì)太多了，一調(diào)酸有機物全出來了。建議你在調(diào)酸之前，用有機溶劑將堿性體系中的雜質(zhì)提取出來一點，這樣調(diào)酸的化出來的產(chǎn)物純度高，應(yīng)該會容易抽濾的!

還有一點 在調(diào)酸后 如果析出的是油狀物的話，適當(dāng)增加攪拌時間，這樣油狀物可能會變成固體，這樣就很容易抽濾了

這種情況在生產(chǎn)中非常常見,除了以上二位朋友提的意見外,通常用的方法有

1、PH值調(diào)節(jié)完成后升溫回流一定時間再冷卻，使結(jié)晶粒變粗，對絕大部分熱穩(wěn)定性較好的物質(zhì)都有良好的效果。

2、改變?nèi)軇w系。

3、超聲波釋晶，效果顯著但得不到良好的晶型。

4、采取慢速自然過濾。

有加壓蒸餾么?

有加壓蒸餾么?我就知道減壓蒸餾?是不是寫錯了?
這是文章原話:

某副教授在有機所進(jìn)修時，加壓蒸餾一容易分解的化合物，由于加熱沒有控制好， 發(fā)生爆炸，場面極其血腥。胸口的洞縫了五十多針！

加壓蒸餾是化工中一種常見的方法之一，如呋喃生產(chǎn)，因沸點太低，主要雜質(zhì)甲基呋喃與之沸點相差很近，就采取了加壓蒸餾，減壓蒸餾降低了物質(zhì)的沸點，往往使不同物質(zhì)的分離難度加大，而加壓蒸餾的最大特點是可以拉開二種沸點很接近的物質(zhì)的沸程差。只是后來塔填料技術(shù)的反展使之被人淡忘了。我們真的老了 ！

加壓蒸餾適于低沸點和易揮發(fā)物質(zhì)的蒸餾,多數(shù)情況下,加壓是為了提高沸點,以便更容易冷凝,可以用一般的冷卻水或鹽水冷卻,同時提出來高回收率,減少損失.

加壓蒸餾特別要注意防止超壓,設(shè)備需要加安全閥,最好是自動控制壓力,冷凝器冷卻水不能斷流.

用氯化鈣能把氯仿中的甲醇除去嗎？

過完柱后的洗脫劑氯仿中含部分甲醇，現(xiàn)在想把甲醇除去，請問是不是用氯化鈣就可以了？謝謝了。

甲醇可與氯化鈣生成絡(luò)合物，但這個絡(luò)合物是絮狀結(jié)構(gòu)，體積很大，只能適合于甲醇含量很少的情況下吸附去除，含量略大，就會生成大量的固體，很難過濾 ！

二氧六環(huán)的精制出問題了?。∈裁丛?？
工具書上說：二氧六環(huán)的純化，一般加入10％質(zhì)量的濃鹽酸與之回流3h，同時慢慢通入氮氣，以除去生成的乙醛，冷至室溫，加入粒狀氫氧化鉀直至不再溶解。然后分去水層，用粒狀氫氧化鉀干燥過夜后，過濾，再加金屬鈉加熱回流數(shù)小時，蒸餾后壓入鈉絲保存。

我用片狀氫氧化鉀代替粒狀的有沒有問題？沒有出現(xiàn)分層，怎么回事？

之前我想直接加入鈉保存過夜后，再回流，結(jié)果鈉是浮在液面上的，只好用CaH2干燥。

工具書上是不是說錯了啊，但是兩本不同的書都是這么處理的，怎么回事呢，困惑ing~~~~~

我公司正好也在用二氧六環(huán),用片狀氫氧化鉀代替粒狀的肯定沒有問題,沒有出現(xiàn)分層，可能原因有二:鹽酸加入量不對,導(dǎo)致氫氧化鉀濃度太低.或是第一次氫氧化鉀的量加入過多,只有固體沒有分層現(xiàn)象.

另外，第一次分層以氫氧化鈉比較好分層十分容易.

生產(chǎn)上不必加鈉絲，用氫氧化鉀脫水后,水份就可控制在0.02%以下，可以滿足大部分合成的需要。

如何把TLC板上兩個很近的點分開？

這兩個點是非對映異構(gòu)體，rf值只差0.04，hex:EA=10:1, rf值0.5左右，
裝了20cm的column, 用hex:EA=20:1的洗脫劑，只分開一半。

求教這里的各位大俠，我到底應(yīng)該用極性小的洗脫劑沖還是就用10:1沖，
感覺用極性小的擴(kuò)散蠻厲害的。

不知道你說的20cm的柱子是什么狀況，比如柱徑比和硅膠/樣品比，因此只能泛泛而談：

1、既然能分開一半，說明對柱層析的條件加以改善還是有望分開的。hex:EA=10:1,
rf值0.5左右，你選擇hex:EA=20:1做洗脫劑。我的建議是先找到rf值0.2左右的系統(tǒng)（估計就是20:1或者30:1），再對此系統(tǒng)稀釋一倍后（如20:1稀釋成40:1）做洗脫劑。

2、對于rf值只差0.04，建議硅膠/樣品比例應(yīng)大于50，且在滿足柱徑比大于10的前提下，盡量選擇直徑比較大的柱子，以減少邊緣效應(yīng)。

3、可以考慮選擇硅膠H作為柱填料。硅膠H比一般粗硅膠的粒度細(xì)且更均勻，因此分離效率要高些，但是也因此阻力大些。所以通常需要加壓。

4、擴(kuò)散厲害，可能是你的柱子走的太慢的緣故，可以嘗試加快些速度。

5、柱子一定要裝得比較好。多花費些時間，把柱子敲打瓷實吧。

一些實驗經(jīng)驗：

1、如何用好溫度計

實驗的過程中,使用好溫度計是非常主要的,因為這關(guān)系到反應(yīng)的成功與否和人身的安全問題,剛接觸實驗的人``可能只知道機械的看溫度到幾度,正因為這樣更多的時候出現(xiàn)沖料,甚至爆炸.在反應(yīng)的過程中,溫度計的主要作用是主動地觀察反應(yīng)體系溫度變化,而不是被動地顯示反應(yīng)體系的溫度.這就需要我們?nèi)グ盐者@個主動和被動問題.

大部分的反應(yīng)是一個放熱的過程,當(dāng)體系達(dá)到一定溫度(反應(yīng)溫度)以后,反應(yīng)體系就會放熱,這時溫度計就會加速度上升(如果沒有主動地去觀察溫度計加速度的變化的話,就會出現(xiàn)沖料,甚至爆炸).所以在做一個反應(yīng)的時候,剛開始加料或者加熱時,要不停地看著溫度計,首先找出反應(yīng)溫度(溫度變化明顯的地方),然后停止加熱,撒去加熱裝置,仔細(xì)觀察溫度的變化,如果溫度接著上升五度以上的話,這就是一個反應(yīng)溫度(注意只是一個反應(yīng)溫度,不一定是你想要的反應(yīng)溫度,可能是副反應(yīng)的溫度).

2、如何防止沖料

沖料是由于溫度急速上升,使產(chǎn)生的氣體不能及時的排出而造成的.沖料之前的主要現(xiàn)象:剛開始的時候,燒瓶上端內(nèi)側(cè)會產(chǎn)生少量的液珠(這證明反應(yīng)體系已經(jīng)有局部回流),溫度變化開始加大;攪拌的旋渦中慢慢充滿氣泡.這時注意要做好降溫和排氣工作,降溫的方法:停止加熱或者關(guān)小加熱,如果氣泡還繼續(xù)增加,先減小攪拌(注意如果你停止了攪拌后,要等溫度降了以后才能慢慢開,不然一開攪拌就會有沖料的危險),用濕布再降溫,然后用水浴降溫.排氣的方法:撒去干燥管,條件可以的話可以在燒瓶上面多加一支回流管,還可以用泵的把氣體帶走.

沖料主要出現(xiàn)在剛開始加熱的時候,所以反應(yīng)和蒸溶劑的時候```要緩慢加熱.正因為這樣,在瓶里裝料的時候```一般不能超過反應(yīng)瓶的2/3. 沖料是件可怕的事情,朋友們要多加小心!

3、冰浴的時候```你攪拌降溫體系了沒有?

時不時地攪拌降溫體系這樣可以加快降溫效果,接近瓶外側(cè)的降溫液體總會比別的地方的溫度高一些,所以在冰浴降溫的時候``經(jīng)常攪拌冰(水)浴可以提高降溫速度.

4、蒸溶劑的時候,你記得在瓶外面保溫了嗎?

溶劑到了沸點的時候,就會蒸出來,但實驗的過程中并不是這樣的,因為你可能忘了在瓶外面加了一些保溫的東東,所以雖然液體到了沸點溫度,但氣體快到瓶口的時候又掉了下來.所以記得保溫.這樣就不會老是蒸不出東西了,

5、在做分析的時候,你做了空白實驗沒有?

在分析之前先做一下空白實驗,可以減少誤差,而且可以知道你現(xiàn)用的溶劑純不純.分析出現(xiàn)了差錯,對于合成人員來說,就像一種暗器,使所有的付出死的不明不白.

6、過柱子時,你會趕跑沙芯層底下的液體嗎?

在沙芯層到閥門之間的空隙如果有液體的話,會使經(jīng)過吸附劑的展開劑不能完全分開.本來經(jīng)過吸附劑的展開劑可以把產(chǎn)品中的各種物質(zhì)分開,但因為沒有趕跑空隙(沙芯層到閥門之間的空隙)中的液體,大忙了一會,結(jié)果分離效果還是不好.得不償失!想要趕跑空隙里的液體,先把閥門打開,用一支毛細(xì)管順著閥門口伸進(jìn)去,伸到空隙里的液體```這樣就可以把里面的液體趕跑.

7、結(jié)晶你用過水析嗎?

當(dāng)你試過多種溶劑的以后,而結(jié)晶出來的產(chǎn)品,還是不能達(dá)到合格的要求的話,不妨試試水析的方法.操作過程:先用易于溶解產(chǎn)品的有機溶劑(這種有機溶劑要能跟水相溶)加熱溶解,然后把水滴加進(jìn)去(方法同于混合溶劑).

液溴的取用和投料問題：

小弟最近做溴代要用到液溴，想請教有經(jīng)驗的同志關(guān)于液溴的取用和投料問題，在此先謝謝了！ 液溴易揮發(fā)，且有毒，有點顧慮 可以試試用針筒去抽。

在裝液溴瓶子的軟塞上插兩根空心針（其中一根通大氣用），再把針筒的針頭插入另一根空心針去抽液溴，這樣可以減少液溴揮發(fā)。由于液溴容易揮發(fā)，抽取液溴時不要過快（盡量使針筒內(nèi)真空度不要太低）。 所有操作一定要在通風(fēng)櫥中進(jìn)行！

首先，就如3樓所說的，所有操作一定要都在通風(fēng)櫥中進(jìn)行！

由于液溴極易揮發(fā)，具有強腐蝕性，屬于劇毒，因而實驗室通常將液溴裝入磨砂玻璃塞的試劑瓶，并加入一定量的水。取用時，有好幾種方法可用，以下這個比較簡便：取用液溴時，只需用一手拿試管或量筒等容器承接于尖嘴導(dǎo)管處（尖嘴伸入容器中），一手輕輕推注射器的活塞，液溴就會通過尖嘴導(dǎo)管流入容器中，這樣操作既安全，又便于控制取用液溴的量。需要注意的是制作取溴裝置時，橡皮塞要用錫箔包住，盡可能用玻璃彎管，少用橡膠管連接。如果玻璃管之間需要用橡膠管連接時，玻璃管管頭之間要盡量緊靠，避免溴蒸氣腐蝕橡皮塞、橡膠管。具體的裝置見圖鏈接所示。

一般我在實驗室做的時候就是采用的這種方法。

也有更簡單的，就是直接取液溴+水的料，加到分液漏斗中，分出下層的液溴和上層的水來，再稱重或計量液溴投量。不過不建議這樣做，因為由于液溴的極易揮發(fā)、強腐蝕性和毒性，有點危險，對人的操作要求相對要高，還有，前提還是：所有操作一定要都在通風(fēng)櫥中進(jìn)行！

我也是前幾天用拉液溴的?。?

1、在通風(fēng)櫥里面進(jìn)行，如果有必要可以帶口罩（面具），操作呢？一定要穩(wěn)，它容易揮發(fā)啊。如果用分液漏斗裝呢？（分液漏斗）就要在下面接一個圓底燒瓶。
2、加液溴：最好的漫漫的呢。滴吧（看你自己的情況）注意速度。太快液溴反映很劇烈。

我今年在實驗室做溴化反應(yīng)用了好幾公斤溴，在實驗室用溴：

1、通風(fēng)分要好
2、工業(yè)溴一般上層有水，要準(zhǔn)備一分液漏斗。
3、將稱重的錐形瓶置天平上，將分液漏斗中下層的溴放入錐形瓶之需要量。
4、然后將錐形瓶中的溴倒入恒壓滴液漏斗中（要快），馬上進(jìn)行滴加操作。

一般不需要用濃硫酸干燥（不管是自由基還是離子反應(yīng)，本人都做過） 注意事項：要帶手套，可以不戴口罩，但通風(fēng)要好。 用過的玻璃設(shè)備要馬上放入水中最好淹沒出口，使溴蒸氣不冒出而被水吸收

做過產(chǎn)物重結(jié)晶：

我在做一個膽酸（含羧基）和胺的反應(yīng)，在縮合劑DCC的作用下，用N-羥基丁二酰亞胺（NHS）把膽酸先轉(zhuǎn)化為活化酯，反應(yīng)后按照文獻(xiàn)用1：1的正己烷和乙酸乙酯可以把膽酸的活化酯重結(jié)晶出來，可是我結(jié)晶出來的不是晶體，而是臘狀物，不知道為什么做不出晶體來。有哪位做過產(chǎn)物的重結(jié)晶的給點建議，謝謝了。

能用一種溶劑重結(jié)晶的話最好用一種溶劑，我覺得混合溶劑重結(jié)晶還是不好掌握，很容易出現(xiàn)那種細(xì)小粉末或者是像你說的那樣似蠟似油的東西。文獻(xiàn)不一定都是可靠的，你可以試試單一溶劑來重結(jié)晶，像氯仿、甲苯之類的極性比乙酸乙酯小、比正己烷大的來做做看。祝好運！

出現(xiàn)蠟狀物可能跟結(jié)晶的物質(zhì)也有關(guān)系，如果說能出現(xiàn)蠟狀物，那能初略分離，盡量抽濾干。重復(fù)幾次，應(yīng)該能夠達(dá)到提純要求。

蠟狀物并不一定就不純嗎 ？

乙酸乙酯＋正己烷結(jié)晶出現(xiàn)油狀物很有可能是析晶太快，產(chǎn)品同油狀雜質(zhì)一起析出?？梢钥紤]正己烷的量減少，剛有產(chǎn)品析出時停止滴加正己烷，繼續(xù)不停的攪拌至產(chǎn)品析出或放入冰柜冷凍。如果冰凍條件下仍有油狀物析出，考慮將滴加正己烷后的混合液放置過夜，使之緩慢析出。不行的話，試一試二氯甲烷+正己烷結(jié)晶，該方法對有些油狀物很靈光。我一位同事試過，二氯甲烷+正己烷多次結(jié)晶結(jié)晶出99％以上純品。

如何將反應(yīng)產(chǎn)生的無機鹽除干凈?

我的反應(yīng)溶劑是甲醇和水.先是無機酸和堿的反映.下來是加過量的亞安鹽反應(yīng).完了后.我怎么樣都除不干凈鹽.而我的產(chǎn)物再極性很強.只容與水,再甲醇中溶解少.結(jié)晶可行嗎??????

看產(chǎn)物的性質(zhì),如沒有酸堿性,可用717與732離子樹脂處理除去陰陽離子.

有酸堿性的,可選擇合適的樹脂對產(chǎn)品進(jìn)行吸附.

分子量很大的選擇納濾過濾除去鹽份.

如果鹽是完全的強酸強堿,用電滲析除去.

LDA制備!

各位仁兄.我做LDA的反應(yīng)做了好幾次都失敗了

有誰做的比較好的,給小弟指點點迷津啊

例如：制備LDA要注意什么啊?

THF要無水，體系無水無氧，二異丙胺要重蒸，取丁基鋰要用針筒或雙針頭導(dǎo)管，-78度滴加。

條件控制嚴(yán)格一點，沒有做不成的

我一般還要把瓶子放煤氣燈上烤一會兒，然后連真空油泵上抽起碼5分鐘。徹底杜絕濕氣。

我做過的,先把反應(yīng)瓶加熱到150度左右,抽氣,補充N2,反復(fù)幾次,然后冷卻下加丁基鋰,零下10就可以了,沒必要深冷,保證加料時候無水無氧(氮氣流保護(hù)),所有溶劑預(yù)先處理,買來的二異丙胺蒸餾得正沸后,用片狀氫氧化鉀干燥,二異丙胺從滴液漏斗里加,只要別加得太快就ok,這個是比較好做的,我第一次做的時候就做成了.

制法：

在干燥的250ml圓底燒瓶或干燥的250ml

Schlenk管上配一個橡膠隔膜，在橡膠隔膜上安裝一個減壓閥和插入一個注射用針頭。將容器置冰浴中冷卻，通過針頭用無氧N2吹掃，在反應(yīng)過程中使容器稍稍保持正壓，先從注射器把2.53g（3.60ml,25.0mmol)純二異丙胺溶于25ml無水**的溶液注入瓶中。然后在電磁攪拌下從注射器滴加含2.53mmol甲基鋰的**溶液，在此加料過程中有甲烷劇烈放出，當(dāng)二異丙胺基鋰在0度攪拌5－10min后，檢查甲基鋰的Gilman顏色試驗呈負(fù)性反應(yīng)。

所用二異丙胺需要純化：二異丙胺與鈉絲或氫化鈉回流30min，然后在干燥容器中N2保護(hù)下蒸餾。

**也需處理：無水**需用鈉絲回流及在N2保護(hù)下蒸餾精制。

關(guān)于生物大分子提取

我是個對生命科學(xué)超級感興趣的大一女生，可惜我的專業(yè)只是和生命科學(xué)稍有關(guān)系而已-_-!

我想問些幼稚的問題，謝謝各位大蝦的解答：

1、提取蛋白質(zhì)和酶等大分子的時候，最后一步是濃縮和凍干，但這個時候的大分子溶液往往是溶解在緩沖液而不是蒸餾水中的，濃縮的時候緩沖液也會被同時濃縮？那么緩沖液的摩爾濃度會被改變，有影響嗎？還有，凍干后得到的干粉，應(yīng)該也包含了緩沖液中的物質(zhì)（如磷酸鹽等）， 請問這樣的干粉性質(zhì)會受緩沖液殘留物的影響嗎？

2、如果實驗室沒有凍干設(shè)備，提取的蛋白質(zhì)只能以液體形態(tài)在零下10度密封保存，該蛋白質(zhì)分子量50000左右，性質(zhì)穩(wěn)定，請問該加什么防腐劑？理論上可以保存多長時間？

3、最后問個菜得不能再菜的問題，其實很容易查到的，只是偶怕頭疼想偷懶……，
哪位哥哥知道生理鹽水的摩爾濃度??？

因為我不是生物專業(yè)的，所以只能給你一個可能的解釋。

1、蛋白質(zhì)等生物大分子在濃縮之前應(yīng)該會經(jīng)過除鹽這一步，而不會將緩沖液與蛋白質(zhì)一起濃縮?？梢允褂冒胪改せ蛴媚z色譜進(jìn)行分離。

2、常用防腐劑有甲苯、苯甲酸、氯仿、百里酚等。蛋白質(zhì)和酶常用的穩(wěn)定劑有硫酸銨糊、蔗糖、甘油等，酶也可加入底物和輔酶以提高其穩(wěn)定性。此外鈣、鋅、硼酸等鹽溶液對某些酶也有一定保護(hù)作用。保存時間不詳。

3、生理鹽水的濃度是0。9%NaCl溶液。摩爾濃度換算后為0。1538mol/l

使用丁基鋰的相關(guān)問題

我現(xiàn)在在做的實驗，先用丁基鋰拔掉吡啶衍生物吡啶環(huán)上的溴然后通二氧化碳，把溴變成羧基。我做的100mg的量，反應(yīng)在100ML反應(yīng)瓶中進(jìn)行，用橡皮塞塞住瓶口，一針擦至瓶底，一針擦至瓶口處，保持N2的流通，沒有抽真空而時長時的通氮。加入的有機鋰按3當(dāng)量一次性針孔加入。反應(yīng)開始時，反應(yīng)液呈微黃色呈清THF溶液，加入丁基鋰后，反應(yīng)液變?yōu)榻燮ど?。并有固休生成，反?yīng)混合物成為乳液。此狀態(tài)保持在-78度2分鐘左右。然后通入二氧化碳?xì)怏w（干冰揮發(fā)生成的），反應(yīng)液很快變?yōu)槟鄄萸嗌ㄍ该鳎^續(xù)攪拌，發(fā)現(xiàn)有白色固體生成。繼續(xù)通二氧化碳，反應(yīng)溫度漸漸的升至室溫，再攪30分鐘，結(jié)果發(fā)現(xiàn)容液揮發(fā)了很多，加入乙醇溶解，做LCMS，結(jié)果顯示還有很多原料沒反應(yīng)，且無產(chǎn)物生成，但有雜質(zhì)生成，TLC板上能明顯看到3個點。請問各位大哥大嫂這是什么原因造成的，我該如何改進(jìn)。這個反應(yīng)應(yīng)該怎么做，有無成功的案例供參考

二氧化碳干燥很容易解決, 用硫酸洗瓶或氯化鈣干燥塔都行. 對溴吡啶類的丁基鋰溴交換反應(yīng), 除了無水無氧和低溫基本操作外, 把溴吡啶往裝有丁基鋰-THF反應(yīng)瓶中滴加反應(yīng)效果更好.

請問如何除去原料藥中的重金屬元素 ：

最近忙于做一種原料藥,合成時用到了Fecl3還有AgBF4,盡管后來過硅藻土,硅膠,氧化鋁,但重金屬還是超標(biāo)(>0.1%),試劑中的重金屬可以控制,但合成及過柱時的重金屬如何避免或除掉?謝謝各位大俠.望幫幫小弟一把.謝謝

先小試一下吧。

生物堿應(yīng)該不影響。將粗品溶于有機溶劑，多數(shù)是乙酸乙酯；用EDTA水溶液與之強烈攪拌，靜置分層。兩次后對有機相常法處理，測定重金屬殘留量。

也可試驗其鹽的水溶液與EDTA水溶液混合，攪拌一定時間后加堿使其沉淀。

工藝要摸索一下才知道。

EDTA在生產(chǎn)操作中用量很小，一噸溶液用量約20克左右，基本不用考慮殘留

制備板后如何徹底除去硅膠？

我的粗產(chǎn)物爬完制備板后，用乙酸乙酯將產(chǎn)物洗出來，可是發(fā)現(xiàn)同時含有一些硅膠跟著產(chǎn)物出來。請問如何將這些硅膠徹底除去？即使很少的硅膠也會對生物測試產(chǎn)生影響。另外，硅膠上似乎總是殘留一些產(chǎn)物未被洗脫（通過觀察產(chǎn)物熒光得知），請問如何選擇溶劑？萬分感謝！

乙酸乙酯不大可能把硅膠洗下來，從沒有遇到過，甲醇有可能。最大的可能是甲醇洗下來了粘合劑羧甲基纖維素鈉。可能是過濾濾芯太粗了。用微孔濾膜試試。

硝基還原 ：

我用氯化亞錫還原硝基,還原產(chǎn)物粘乎乎的,什么溶劑都不溶解,更本無法進(jìn)一步提純.
請大蝦們指點指點,不慎感激.

沒關(guān)系的，許多絮狀的東西,多加些水慢慢在分液漏斗里慢慢放掉就可,如果堵了,用鐵絲疏通一下也行.不過你也可以加些硅藻土過濾,多用些溶劑洗滌濾碴.

可以用加氫還原的方法還原！用雷尼鎳還原硝基，

鈀碳也行，我也用過氯化亞錫還原硝基，后處理很難提純，就放棄了。 加氫的辦法很好！

你可以試一下，水合肼還原，用氯化鐵作催化劑，不知道你的硝基是什么情況的硝基物，另外你可以試一下硫化鈉，多硫化鈉的還原，這是比較簡單的，鐵粉一般較粘，離心的時候較難，所以最好還是采用能進(jìn)行油水分層的。

如果一定要用氯化亞錫的話可以參看文獻(xiàn)：

1. J.Am.Chem.Soc. 1987,109:3098.
2. Org.Syn.Coll.Vol. 1943,, 2 : 130.
還原硝基我常用Fe-HCL，一直覺得挺不錯的方法 。用10%Pd/C，H2，HCl in ether（1-2eq)，常溫常壓,一般都能搞定。還原硝基我常用Fe-NH4Cl,Fe-HAc，覺得不錯。 我勸你還是用鈀碳，我開始做硝基還原時就用氯化亞錫，現(xiàn)象和你說的差不多，后改為鈀碳問題就解決了

水溶性太好的東西 怎樣拿出??

最近一直在做分離,混合物里成分很多,有一種大環(huán)是我們老板很想要的， 但水溶性太好,用丙酮沉淀后 一會兒就又在水里溶解,那位高手指教下。 有沒有什么好的但又比較容易辦到的方法,謝謝!!!!

要看被提純體系的雜質(zhì)情況，如鹽含量高，我們往往采取冷凍干燥，再用有機溶劑溶解過濾，除去鹽份，再選擇合適的有機溶劑進(jìn)行重結(jié)晶。鹽含量低則采用水與其它的混合溶劑結(jié)晶，過濾后立即用低沸點的有機溶劑漂洗烘干。

請教 DCC問題：

羧酸和 醇的酯化 反應(yīng) ，我用DCC做脫水劑，請問生成的DCU和 未反應(yīng)的DCC是否溶于丙酮？DCC的量是怎么確定的？它呈液體狀還能達(dá)到分析純的級別嗎？哪位高手幫幫忙？

我請問你,為什么一個酯化反應(yīng),你非得用DCC催化呢?通俗的用濃HH2SO4 或HCL氣體不行嗎?

再者,如果你非得用DCC這一類催化劑,我建議你用EDC,他比較好處理,反映完后,水洗就可以.

用濃硫酸或者HCl的方法多數(shù)僅限于醇是低級醇如甲醇、乙醇。若樓主想將兩個含有羧基和羥基的大片斷連接（如紫杉醇合成中的7-TES-Baccatin III 的13位羥基和側(cè)鏈酸的酯化），用DCC縮合恐怕是合適的方法。當(dāng)然，用EDC更好，不過成本高許多。

DCU的去除是不容易，不過一般過兩個柱子應(yīng)該就沒有很多殘余了。單獨用重結(jié)晶恐怕不行，因為DCU在大部分有機溶劑中的溶解度都不好，會析出來的。而且，DCC的吸水比較慢，會在放置析晶的過程中緩慢變成DCU，因此即使熱溶并過濾除去DCU的過飽和溶液，也會因為DCC的吸水而析出DCU。

能不能使用酰氯的方法，取決于反應(yīng)底物。如果底物對酸不敏感，還是酰氯的方法比較方便。

另外，如果產(chǎn)物酯是最終產(chǎn)物，需要進(jìn)行元素分析等鑒定，最好不要使用DCC，太難根除了。。。

DCC吸水后形成DCU，有少量混雜在產(chǎn)物中，一般先柱層析，后重結(jié)晶就可以除去了，注意重結(jié)晶得用甲醇或者乙醇，否則只有多次柱層析了。

至于用酰氯來做酯，一般的分子量較小的酸比較適用，提純也很容易。若分子量較大，且苯環(huán)較多，就難以在低溫下做酯了，因為相應(yīng)的酰氯很難溶，而高溫下做酯產(chǎn)率會下降，并有色素形成。另外，若醇為長鏈仲醇，酰氯法就更難做酯了。

膦葉立德怎么合成 ：

我用三苯基甲基溴化膦和NaH反應(yīng)2個小時，THF為溶劑，溫度70度，
然后再投入苯甲醛，但是沒有得到苯乙烯
估計是膦葉立德沒有生成，查資料，發(fā)現(xiàn)上面說的都很簡單
所以特向大家請教

反應(yīng)生成的膦葉立德是怎么樣的，溶于THF嗎？怎么得到和表征它？

1.以THF為溶劑合成磷葉立德，如果我沒記錯的話，THF的沸點是65度，你反應(yīng)溫度怎么能達(dá)到70度呢？
2.生成磷葉立德過程需要嚴(yán)格的無水無氧。
3.反應(yīng)生成的膦葉立德應(yīng)該是白色或黃色的，不易溶于THF。
4.磷葉立德和苯甲醛應(yīng)該在0度左右反應(yīng)，因此該等溶液冷卻后再加苯甲醛。

二氯亞砜 ：

買來的二氯亞砜是深黃色的。
我蒸了兩遍還是黃色的。按理說蒸出來是淡黃色的就行，雖然顏色比原來淡了一點點，但是還是黃。我不想因為我的溶劑蒸的不好影響別人反應(yīng)的失敗。

說明：我用的是直接普通蒸餾方法，沒有加別的東西處理，尾氣直接接堿吸收裝置，忘接干燥管了。跟這個沒注意干燥的問題有關(guān)嗎？

久置后有氯氣生成,溶解在產(chǎn)物里了,上回流塔重蒸一次去掉部分前餾分就可得到無色透明的二氯亞砜,簡單蒸餾也行,但得控制蒸出速度較慢,最好用分水器進(jìn)行蒸餾,作用是二氯亞砜在沸點條件下被冷凝,氯氣的溶解度很低,不易被溶解到產(chǎn)品中.
酯化反應(yīng) ：

做酯化反應(yīng)時，以前學(xué)的都是用濃硫酸做催化劑，這個反應(yīng)有許多缺點。

最近看到一篇教學(xué)文獻(xiàn)說用鹽酸做催化劑，產(chǎn)率提高了而且后處理也簡單。但是它并沒有說明用的是多大濃度的鹽酸，而且這只是一篇教學(xué)方法改進(jìn)的文獻(xiàn)，不知道大俠們做酯化反應(yīng)時都是用什么做催化劑的？

酯化反應(yīng):
1,常用H2SO4
2,通入HCl氣體(氨基酸酯化反應(yīng)一般用這方法)
3,酰氯 (實質(zhì)上也是和醇反應(yīng)產(chǎn)生的HCl氣體)
4,DCC
5,HOBT/EDC/DIEA
我個人就用過這么些方法,交流!

再推薦幾個：1。雜多酸；2。全氟磺酸樹脂；3。硫酸氫鈉；4。苯磺酸

怎么通入HCl氣體？

可以用一個2口瓶，瓶中裝入NaCl，一個口放恒壓加料漏斗（加料漏斗中加入濃硫酸），另一個口用帶一個孔（空中插入一個玻璃管）的橡膠塞塞上，將玻璃管的另一端用膠管連接另一個玻璃管導(dǎo)入你的反應(yīng)器中即可，當(dāng)然這中間也可以加一個裝有濃硫酸的干燥瓶，看你的試驗需要了

補充點，容器盡量用大一點的，必須保證生成的HCl一次夠用，我去年做過一次，就是因為選的容器小最終又換了一次裝置，很麻煩的，另外就是防止倒吸，也吃過這種虧的。